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核酸檢測(cè)陽(yáng)性變化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-04-25     點(diǎn)擊數(shù):

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核酸檢測(cè)陽(yáng)性變化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)解析

一、檢測(cè)樣品

核酸檢測(cè)的主要樣品類型包括鼻咽拭子口咽拭子、痰液肺泡灌洗液等。其中,鼻咽拭子因采樣便捷且病毒載量較高,成為最常用的檢測(cè)樣本。針對(duì)特殊場(chǎng)景(如環(huán)境監(jiān)測(cè)),還可能采集物體表面拭子、廢水等作為補(bǔ)充樣本。

二、檢測(cè)項(xiàng)目

核酸檢測(cè)的核心目標(biāo)是檢測(cè)樣本中是否存在新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)的特異性核酸片段,通常針對(duì)病毒基因組中的ORF1ab基因N基因進(jìn)行雙靶標(biāo)檢測(cè)。部分檢測(cè)方案還會(huì)包含內(nèi)參基因(如RNase P),用于監(jiān)控采樣及提取過程的質(zhì)量。

三、檢測(cè)方法

當(dāng)前主流的檢測(cè)方法為實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)(Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction)。其原理是通過逆轉(zhuǎn)錄將病毒RNA轉(zhuǎn)化為DNA,再通過PCR擴(kuò)增目標(biāo)片段,利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增進(jìn)程。當(dāng)樣本的熒光信號(hào)達(dá)到預(yù)設(shè)閾值(Ct值)時(shí),可判定為陽(yáng)性。

關(guān)鍵步驟

  1. 樣本滅活與核酸提取:使用裂解液滅活病毒后,通過磁珠法或離心柱法提取RNA;
  2. 試劑配制與擴(kuò)增:將提取的RNA與引物、探針、酶混合,在PCR儀中進(jìn)行循環(huán)擴(kuò)增;
  3. 結(jié)果判讀:根據(jù)Ct值及擴(kuò)增曲線形態(tài),結(jié)合陰陽(yáng)性對(duì)照綜合判定結(jié)果。

四、檢測(cè)儀器

核酸檢測(cè)流程涉及以下核心設(shè)備:

  1. 核酸提取儀:如Qiagen QIAcube、Bioer GenePure等,用于自動(dòng)化提取病毒RNA;
  2. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀:如ABI 7500、Roche LightCycler 480等,支持多通道熒光檢測(cè);
  3. 生物安全柜:確保樣本處理過程符合生物安全二級(jí)(BSL-2)標(biāo)準(zhǔn);
  4. 輔助設(shè)備:包括離心機(jī)、振蕩器、微量移液器等。

五、陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)的變化與解讀

根據(jù)最新指南,核酸檢測(cè)陽(yáng)性需滿足以下條件:

  • 單靶標(biāo)陽(yáng)性:若ORF1ab或N基因單一靶標(biāo)Ct值≤40,需重復(fù)檢測(cè)確認(rèn);
  • 雙靶標(biāo)陽(yáng)性:兩個(gè)靶標(biāo)Ct值均≤40,可直接判定為陽(yáng)性;
  • 低Ct值動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè):對(duì)于Ct值在35-40的“灰區(qū)”結(jié)果,需結(jié)合流行病學(xué)史及臨床癥狀復(fù)檢,避免假陽(yáng)性干擾。

六、檢測(cè)流程優(yōu)化方向

為提高檢測(cè)準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)室需定期進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控(如陰性/陽(yáng)性對(duì)照、重復(fù)性測(cè)試),并參與室間質(zhì)評(píng)。此外,自動(dòng)化設(shè)備的普及、多重PCR技術(shù)的應(yīng)用及數(shù)字化報(bào)告系統(tǒng)的推廣,將進(jìn)一步縮短檢測(cè)時(shí)間并降低人為誤差。

聲明:本文內(nèi)容基于現(xiàn)行技術(shù)規(guī)范整理,實(shí)際檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)以官方發(fā)布文件為準(zhǔn)。


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測(cè)試流程

核酸檢測(cè)陽(yáng)性變化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(核酸檢測(cè)陽(yáng)性變化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn))還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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