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核酸檢測實(shí)驗(yàn)操作檢測標(biāo)準(zhǔn)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-04-25     點(diǎn)擊數(shù):

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核酸檢測實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)指南

檢測樣品

核酸檢測的常見樣品類型包括:

  1. 上呼吸道樣本:咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物等;
  2. 下呼吸道樣本:痰液、支氣管肺泡灌洗液等;
  3. 血液樣本:全血或血清(適用于特定病原體檢測);
  4. 其他生物樣本:如糞便(針對腸道病原體)或組織樣本。

采樣需使用無菌拭子或?qū)S帽4婀?,采集后需立即置于病毒保存液中,并?–8℃暫存。若需長時(shí)間運(yùn)輸或保存,需在–70℃以下冷凍。

檢測項(xiàng)目

核酸檢測的核心項(xiàng)目包括:

  1. 核酸提取:從樣本中分離純化目標(biāo)核酸(RNA或DNA);
  2. 目標(biāo)基因檢測:通過特異性引物和探針擴(kuò)增病原體基因片段(如新冠病毒的ORF1ab、N基因);
  3. 內(nèi)參基因檢測:驗(yàn)證樣本采集及提取質(zhì)量(如人類RNase P基因);
  4. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):包括陰性對照、陽性對照和重復(fù)性驗(yàn)證。

檢測方法

核酸檢測遵循以下標(biāo)準(zhǔn)化流程: 1. 核酸提取 采用磁珠法或離心柱法,通過裂解液釋放核酸,結(jié)合磁珠吸附技術(shù)純化目標(biāo)核酸。操作需在生物安全柜內(nèi)完成,避免交叉污染。

2. 實(shí)時(shí)熒光RT-PCR (1)配置反應(yīng)體系:將提取的核酸與預(yù)混試劑(含酶、引物、探針)混合; (2)擴(kuò)增程序:設(shè)置變性、退火、延伸三步循環(huán)(通常45–50個(gè)循環(huán)),儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號(hào); (3)結(jié)果判定:根據(jù)擴(kuò)增曲線和Ct值(閾值循環(huán)數(shù))判斷陰陽性。

3. 質(zhì)量控制 每批次實(shí)驗(yàn)需包含陰性對照(無模板)和陽性對照(已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品)。若陰性對照出現(xiàn)擴(kuò)增,則實(shí)驗(yàn)無效;陽性對照需符合預(yù)設(shè)Ct值范圍。

檢測儀器

核酸檢測依賴高精度儀器完成,主要包括:

  1. 核酸提取儀:自動(dòng)化完成樣本裂解、純化步驟(如Thermo KingFisher、Qiagen QIAcube);
  2. 實(shí)時(shí)熒光PCR儀:用于核酸擴(kuò)增與熒光信號(hào)采集(如ABI 7500、Roche LightCycler 480);
  3. 生物安全柜:提供無菌操作環(huán)境,保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員及樣本安全;
  4. 離心機(jī)與振蕩器:用于樣本預(yù)處理及試劑混合。

注意事項(xiàng)

  1. 實(shí)驗(yàn)人員需穿戴防護(hù)裝備(防護(hù)服、手套、護(hù)目鏡);
  2. 實(shí)驗(yàn)廢棄物需經(jīng)高壓滅菌處理;
  3. 檢測結(jié)果需結(jié)合臨床表征綜合判斷,低病毒載量樣本可能需重復(fù)檢測。

通過標(biāo)準(zhǔn)化操作流程與嚴(yán)格質(zhì)控,核酸檢測可為疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查提供可靠依據(jù)。


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實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測試流程

核酸檢測實(shí)驗(yàn)操作檢測標(biāo)準(zhǔn)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對于(核酸檢測實(shí)驗(yàn)操作檢測標(biāo)準(zhǔn))還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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