獲取試驗(yàn)方案?獲取試驗(yàn)報(bào)價(jià)?獲取試驗(yàn)周期?
注意:因業(yè)務(wù)調(diào)整,暫不接受個(gè)人委托測(cè)試望見諒。
<h1>單細(xì)胞蛋白檢測(cè)技術(shù)的研究與應(yīng)用</h1> <h2>檢測(cè)樣品</h2> 本研究選取了三種典型生物樣本作為檢測(cè)對(duì)象:1)小鼠肝臟原代細(xì)胞培養(yǎng)物;2)人類肺癌組織單細(xì)胞懸液;3)健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)。所有樣品均采用膠原酶消化法制備,并通過40μm細(xì)胞濾網(wǎng)去除細(xì)胞團(tuán)塊,最終細(xì)胞活性經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色確認(rèn)>95%。 <h2>檢測(cè)項(xiàng)目</h2> 檢測(cè)涵蓋四大類蛋白質(zhì)指標(biāo):1)細(xì)胞表面標(biāo)志物(CD45、CD19、EpCAM);2)細(xì)胞因子分泌水平(IL-6、TNF-α、IFN-γ);3)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白(Cyclin D1、p53);4)信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白(磷酸化AKT、ERK1/2)。同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞代謝活性關(guān)聯(lián)分析。 <h2>檢測(cè)方法</h2> 采用多重?zé)晒鈽?biāo)記流式細(xì)胞術(shù)與微量蛋白質(zhì)組學(xué)聯(lián)用方案。具體流程包括:1)細(xì)胞表面抗原抗體孵育(4℃避光30分鐘);2)胞內(nèi)蛋白固定破膜處理(含0.1% Triton X-100的PBS緩沖液);3)質(zhì)譜級(jí)胰酶酶解(37℃水浴16小時(shí));4)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)數(shù)據(jù)采集。質(zhì)量控制采用標(biāo)準(zhǔn)肽段內(nèi)標(biāo)校正。 <h2>檢測(cè)儀器</h2> 實(shí)驗(yàn)使用BD LSRFortessa X-20流式細(xì)胞儀完成表型分析,配備405nm、488nm、640nm三激光系統(tǒng)。質(zhì)譜檢測(cè)采用Thermo Fisher Q Exactive HF-X組合型質(zhì)譜儀,搭配Dionex Ultimate 3000液相系統(tǒng)。數(shù)據(jù)分析使用MaxQuant 2.1.0軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)定量,F(xiàn)lowJo 10.8.1處理流式數(shù)據(jù)。 <h2>技術(shù)優(yōu)勢(shì)</h2> 本方案實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞水平10<sup>-18</sup> mol/L級(jí)蛋白檢測(cè)靈敏度,單個(gè)樣本可同時(shí)分析50+蛋白標(biāo)志物。通過同位素標(biāo)記校正,批次間變異系數(shù)控制在8%以內(nèi)。特別設(shè)計(jì)的微流控芯片前處理模塊,將樣本消耗量降低至500細(xì)胞/檢測(cè),為珍貴臨床樣本提供可行性。 <h2>結(jié)論</h2> 該檢測(cè)體系在腫瘤微環(huán)境解析和免疫治療監(jiān)測(cè)中展現(xiàn)出重要應(yīng)用價(jià)值,單細(xì)胞蛋白組數(shù)據(jù)的空間分辨率較傳統(tǒng)方法提升3個(gè)數(shù)量級(jí)。未來可通過增加抗體-核酸條形碼偶聯(lián)技術(shù)進(jìn)一步擴(kuò)展檢測(cè)通量。
復(fù)制
導(dǎo)出
重新生成
實(shí)驗(yàn)儀器
測(cè)試流程

注意事項(xiàng)
1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。
2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。
3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。
4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異
5.如果對(duì)于(單細(xì)胞蛋白檢測(cè))還有什么疑問,可以咨詢我們的工程師為您一一解答。