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注意：因業(yè)務(wù)調(diào)整，暫不接受個人委托測試望見諒。

細(xì)胞中支原體檢測的關(guān)鍵流程與技術(shù)要點(diǎn)

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的質(zhì)量問題之一，可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性甚至導(dǎo)致細(xì)胞功能異常。為確保細(xì)胞樣本的純凈性，需通過標(biāo)準(zhǔn)化流程進(jìn)行支原體檢測。以下從檢測樣品、檢測項(xiàng)目、方法及儀器等方面展開說明。

檢測樣品

支原體檢測的樣本通常包括以下幾類：

1. 哺乳動物細(xì)胞系：如HEK293、CHO、HeLa等常用細(xì)胞系。
2. 原代細(xì)胞：從動物或人體直接分離培養(yǎng)的細(xì)胞。
3. 干細(xì)胞及類器官：如誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSCs）或3D培養(yǎng)的類器官模型。
4. 病毒疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞基質(zhì)：如Vero細(xì)胞、MDCK細(xì)胞等。

檢測項(xiàng)目

支原體檢測的核心目標(biāo)包括：

1. 支原體污染篩查：確認(rèn)樣本中是否存在支原體污染。
2. 支原體菌種鑒定：明確污染源的具體菌種（如肺炎支原體、口腔支原體等）。
3. 定量分析：評估污染程度（如通過核酸拷貝數(shù)定量）。

檢測方法

目前主流的支原體檢測技術(shù)包括以下四種：

1. 培養(yǎng)法 通過將樣本接種于支原體專用培養(yǎng)基（如Hayflick培養(yǎng)基），在厭氧條件下培養(yǎng)28天，觀察是否出現(xiàn)典型的“煎蛋樣”菌落。該方法特異性高，但耗時較長。

2. PCR法 利用支原體特異性引物（如靶向16S rRNA基因序列），通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增DNA片段，結(jié)合電泳或熒光探針判斷結(jié)果。該方法靈敏度高，可在4-6小時內(nèi)完成檢測。

3. 熒光染色法 使用Hoechst 33258等熒光染料對細(xì)胞DNA進(jìn)行染色，通過熒光顯微鏡觀察細(xì)胞周圍是否出現(xiàn)支原體特有的微小顆粒。此方法操作簡便，但需排除其他微生物干擾。

4. 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 基于支原體膜蛋白與特異性抗體的結(jié)合反應(yīng)，通過顯色反應(yīng)判斷污染情況，適用于高通量篩查。

檢測儀器

不同檢測方法需匹配相應(yīng)的儀器設(shè)備：

• PCR儀：用于核酸擴(kuò)增（如Bio-Rad T100 Thermal Cycler）。
• 熒光顯微鏡：觀察染色樣本（如Olympus IX73）。
• 酶標(biāo)儀：讀取ELISA板吸光度值（如Thermo Fisher Multiskan GO）。
• 生化培養(yǎng)箱：提供恒溫恒濕環(huán)境以支持培養(yǎng)法（如Memmert INCOmed）。
• 高速離心機(jī)：用于樣本預(yù)處理（如Eppendorf 5430R）。

結(jié)語

支原體檢測是細(xì)胞質(zhì)量控制的重要環(huán)節(jié)。通過選擇適配的檢測方法并規(guī)范操作流程，可有效避免因污染導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)偏差，為細(xì)胞相關(guān)研究及生物制品生產(chǎn)提供可靠保障。建議實(shí)驗(yàn)室結(jié)合樣本類型、檢測周期及靈敏度需求，綜合制定檢測方案。

實(shí)驗(yàn)儀器

測試流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考，因?yàn)槊總€樣品和項(xiàng)目都有所不同，所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于（樣品量）的需求，最好是先咨詢我們的工程師確定，避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個工作日左右，部分樣品有所差異

5.如果對于（細(xì)胞中支原體檢測）還有什么疑問，可以咨詢我們的工程師為您一一解答。