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循環(huán)載荷斷口疲勞臺(tái)階實(shí)驗(yàn)

原創(chuàng)發(fā)布者:北檢院    發(fā)布時(shí)間:2025-08-08     點(diǎn)擊數(shù):

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信息概要

血小板滲透脆性測(cè)試是第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)針對(duì)血小板功能開(kāi)展的重要檢測(cè)項(xiàng)目,主要通過(guò)觀察血小板在不同濃度低滲溶液中的破裂情況,評(píng)估其對(duì)低滲環(huán)境的抵抗能力。該測(cè)試是診斷血小板功能障礙性疾病的關(guān)鍵手段之一,對(duì)免疫性血小板減少性紫癜、血小板無(wú)力癥、巨血小板綜合征等疾病的鑒別診斷具有重要價(jià)值。同時(shí),其結(jié)果可輔助臨床制定抗血小板治療方案、評(píng)估術(shù)前出血風(fēng)險(xiǎn)及監(jiān)測(cè)術(shù)后出血情況,為臨床決策提供科學(xué)依據(jù)。

檢測(cè)項(xiàng)目

血小板滲透脆性試驗(yàn):通過(guò)不同濃度低滲氯化鈉溶液,檢測(cè)血小板破裂的最低濃度,反映血小板對(duì)低滲環(huán)境的抵抗能力。

血小板計(jì)數(shù):通過(guò)血液細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)單位體積內(nèi)血小板數(shù)量,輔助判斷血小板數(shù)量異常(增多或減少)。

血小板壓積:由血小板計(jì)數(shù)與平均血小板體積計(jì)算得出,反映血小板總體積占全血體積的比例。

平均血小板體積:通過(guò)血液細(xì)胞分析儀分析血小板大小分布,提示血小板生成及破壞情況。

血小板分布寬度:通過(guò)血液細(xì)胞分析儀計(jì)算血小板大小變異系數(shù),反映血小板大小異質(zhì)性。

大型血小板比率:通過(guò)血液細(xì)胞分析儀統(tǒng)計(jì)大型血小板(直徑>12μm)占總血小板的比例,提示血小板生成狀態(tài)。

血小板黏附試驗(yàn):采用玻璃珠柱法或旋轉(zhuǎn)玻璃管法,檢測(cè)血小板黏附于異物表面的能力,評(píng)估血小板初期止血功能。

血小板聚集試驗(yàn):采用比濁法或阻抗法,檢測(cè)ADP、膠原等誘導(dǎo)劑引起的血小板聚集率,反映血小板聚集功能。

血小板釋放試驗(yàn):通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法或放射免疫法,檢測(cè)血小板釋放的β-血小板球蛋白(β-TG)、血小板第四因子(PF4)等物質(zhì),反映血小板活化程度。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)或免疫熒光法,檢測(cè)血小板表面糖蛋白Ⅱb/Ⅲa的表達(dá)量,該蛋白是血小板聚集的關(guān)鍵受體,其缺乏或功能異??蓪?dǎo)致血小板無(wú)力癥。

血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)或免疫熒光法,檢測(cè)血小板表面糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ復(fù)合物的表達(dá),該復(fù)合物參與血小板黏附過(guò)程,其缺陷可引起巨血小板綜合征。

血小板因子Ⅲ有效性試驗(yàn):通過(guò)凝血時(shí)間測(cè)定,檢測(cè)血小板表面因子Ⅲ的促凝血功能,反映血小板參與凝血的能力。

β-血小板球蛋白(β-TG)測(cè)定:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中β-TG水平,該物質(zhì)由血小板釋放,其升高提示血小板活化。

血小板第四因子(PF4)測(cè)定:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中PF4含量,PF4主要來(lái)自血小板α顆粒,其水平升高反映血小板活化。

血栓烷B2(TXB2)測(cè)定:采用放射免疫法或酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中TXB2水平,TXB2是血小板花生四烯酸代謝產(chǎn)物,其升高提示血小板活化。

6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)測(cè)定:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中6-Keto-PGF1α水平,該物質(zhì)是前列腺素I2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物,與TXB2平衡,其降低提示血管內(nèi)皮功能異常。

血小板活化標(biāo)志物CD62P檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面CD62P(P-選擇素)的表達(dá),CD62P由血小板α顆粒釋放,是血小板活化的特異性標(biāo)志物。

血小板活化標(biāo)志物CD63檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面CD63的表達(dá),CD63存在于血小板溶酶體膜,其表達(dá)升高提示血小板脫顆?;罨?。

血小板ATP含量測(cè)定:采用生物發(fā)光法檢測(cè)血小板內(nèi)ATP水平,ATP是血小板能量代謝的重要物質(zhì),其含量異常提示血小板功能障礙。

血小板鈣流檢測(cè):采用熒光探針(如Fura-2)負(fù)載血小板,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡檢測(cè)胞內(nèi)鈣濃度變化,反映血小板活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。

血小板膜磷脂酰絲氨酸(PS)暴露檢測(cè):采用Annexin V熒光染色法,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面PS暴露情況,PS是磷脂酰絲氨酸,其暴露提示血小板凋亡或活化。

血小板凝血酶敏感蛋白(TSP)測(cè)定:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中TSP水平,TSP由血小板釋放,參與血小板聚集和黏附過(guò)程。

血小板纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)測(cè)定:采用發(fā)色底物法檢測(cè)血漿中PAI-1活性,PAI-1可抑制纖溶酶原激活物,其水平異常與血栓形成相關(guān)。

血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1(PECAM-1)檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面PECAM-1的表達(dá),PECAM-1參與血小板與內(nèi)皮細(xì)胞的相互作用,其異常與血管損傷有關(guān)。

血小板源性生長(zhǎng)因子(PDGF)測(cè)定:采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中PDGF水平,PDGF由血小板釋放,具有促進(jìn)細(xì)胞增殖和修復(fù)的作用,其水平異常與纖維化疾病相關(guān)。

血小板氧化應(yīng)激標(biāo)志物(8-OHdG)測(cè)定:采用高效液相色譜法檢測(cè)血小板內(nèi)8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)水平,8-OHdG是DNA氧化損傷的標(biāo)志物,其升高提示血小板氧化應(yīng)激增加。

血小板自身抗體檢測(cè)(抗GPⅡb/Ⅲa抗體):采用免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中抗血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa抗體,該抗體是免疫性血小板減少性紫癜的重要致病因素。

血小板補(bǔ)體C3b受體檢測(cè):采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血小板表面C3b受體(CR1)的表達(dá),CR1參與免疫復(fù)合物的清除,其異常與免疫性疾病相關(guān)。

血小板黏附率測(cè)定:采用玻璃珠柱法或旋轉(zhuǎn)玻璃管法,計(jì)算血小板黏附于玻璃珠或玻璃管的比例,量化血小板黏附功能。

血小板聚集率測(cè)定(阻抗法):通過(guò)血小板功能分析儀的電極檢測(cè)血小板聚集引起的阻抗變化,量化血小板聚集功能,適用于全血標(biāo)本。

抗血小板藥物療效監(jiān)測(cè)(如阿司匹林、氯吡格雷):通過(guò)血小板聚集試驗(yàn)檢測(cè)藥物對(duì)血小板聚集的抑制率,評(píng)估藥物療效。

檢測(cè)范圍

新鮮靜脈血標(biāo)本,EDTA抗凝血標(biāo)本,枸櫞酸鈉抗凝血標(biāo)本,肝素抗凝血標(biāo)本,血小板濃縮液標(biāo)本,冷凍血小板標(biāo)本,血小板功能障礙患者標(biāo)本,免疫性血小板減少性紫癜患者標(biāo)本,血小板無(wú)力癥患者標(biāo)本,巨血小板綜合征患者標(biāo)本,血栓性疾病患者標(biāo)本,出血性疾病患者標(biāo)本,骨髓增生異常綜合征患者標(biāo)本,白血病患者標(biāo)本,再生障礙性貧血患者標(biāo)本,肝硬化患者標(biāo)本,尿毒癥患者標(biāo)本,糖尿病患者標(biāo)本,高血壓患者標(biāo)本,系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者標(biāo)本,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者標(biāo)本,藥物性血小板減少患者標(biāo)本,妊娠相關(guān)血小板減少患者標(biāo)本,新生兒血小板減少患者標(biāo)本,遺傳性血小板疾病患者標(biāo)本,獲得性血小板疾病患者標(biāo)本,術(shù)前血小板功能評(píng)估標(biāo)本,術(shù)后出血監(jiān)測(cè)標(biāo)本,輸血前血小板功能檢測(cè)標(biāo)本,抗血小板藥物療效監(jiān)測(cè)標(biāo)本,化療后血小板功能評(píng)估標(biāo)本,骨髓移植后血小板功能監(jiān)測(cè)標(biāo)本,血栓性血小板減少性紫癜患者標(biāo)本,彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)患者標(biāo)本,溶血尿毒綜合征患者標(biāo)本。

檢測(cè)方法

血小板滲透脆性試驗(yàn):采用梯度濃度(0.4%~0.8%)的低滲氯化鈉溶液,與血小板懸液混合后孵育,通過(guò)顯微鏡觀察或分光光度計(jì)檢測(cè)血小板破裂的最低濃度,反映血小板對(duì)低滲環(huán)境的抵抗能力。

全血血小板計(jì)數(shù):使用血液細(xì)胞分析儀,通過(guò)電阻抗法或光散射法計(jì)數(shù)單位體積(μL)內(nèi)的血小板數(shù)量,是血小板數(shù)量異常的常規(guī)檢測(cè)方法。

血小板壓積測(cè)定:由血小板計(jì)數(shù)(PLT)與平均血小板體積(MPV)計(jì)算得出(血小板壓積=PLT×MPV×10??),反映血小板總體積占全血體積的比例。

平均血小板體積測(cè)定:通過(guò)血液細(xì)胞分析儀的光散射或電阻抗技術(shù),分析血小板大小分布,計(jì)算平均血小板體積(MPV),MPV增大提示血小板生成活躍或破壞增加。

血小板分布寬度測(cè)定:通過(guò)血液細(xì)胞分析儀計(jì)算血小板大小的變異系數(shù)(RDW),反映血小板大小的異質(zhì)性,RDW增大提示血小板大小不均。

大型血小板比率測(cè)定:使用血液細(xì)胞分析儀,統(tǒng)計(jì)直徑>12μm的大型血小板占總血小板的比例,大型血小板比率升高提示血小板生成活躍(如特發(fā)性血小板減少性紫癜)。

血小板黏附試驗(yàn)(玻璃珠柱法):將全血通過(guò)裝有玻璃珠的柱子,血小板黏附于玻璃珠表面,計(jì)算黏附后血小板減少的比例(血小板黏附率=(黏附前血小板數(shù)-黏附后血小板數(shù))/黏附前血小板數(shù)×100%),反映血小板黏附功能。

血小板聚集試驗(yàn)(比濁法):將富血小板血漿(PRP)與誘導(dǎo)劑(如ADP、膠原)混合,通過(guò)分光光度計(jì)檢測(cè)血漿濁度變化,計(jì)算血小板聚集率(聚集率=(PRP濁度-聚集后濁度)/PRP濁度×100%),是血小板聚集功能的經(jīng)典檢測(cè)方法。

血小板釋放試驗(yàn)(酶聯(lián)免疫吸附法):收集血小板激活后的上清液,使用特異性抗體檢測(cè)β-TG、PF4等釋放產(chǎn)物的含量,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)定量分析,反映血小板活化程度。

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa檢測(cè)(流式細(xì)胞術(shù)):用熒光標(biāo)記的抗GPⅡb/Ⅲa抗體染色血小板,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞比例及熒光強(qiáng)度,反映GPⅡb/Ⅲa的表達(dá)量,用于血小板無(wú)力癥的診斷。

血小板膜糖蛋白Ⅰb/Ⅸ/Ⅴ檢測(cè)(免疫熒光法):使用熒光標(biāo)記的抗GPⅠb、GPⅨ或GPⅤ抗體染色血小板,通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)觀察熒光表達(dá),用于巨血小板綜合征的診斷。

血小板因子Ⅲ有效性試驗(yàn)(凝血時(shí)間法):將血小板懸液與正常血漿混合,加入凝血酶原復(fù)合物,檢測(cè)凝血時(shí)間,若凝血時(shí)間延長(zhǎng),提示血小板因子Ⅲ功能異常。

β-血小板球蛋白(β-TG)測(cè)定(ELISA法):將血漿樣本加入包被有抗β-TG抗體的微孔板,與酶標(biāo)記抗體結(jié)合,通過(guò)底物顯色反應(yīng)定量檢測(cè)β-TG水平,其升高提示血小板活化。

血小板第四因子(PF4)測(cè)定(ELISA法):采用雙抗體夾心ELISA法,包被抗PF4抗體,加入血漿樣本和酶標(biāo)記抗體,通過(guò)顯色反應(yīng)定量檢測(cè)PF4含量,其水平升高反映血小板活化。

血栓烷B2(TXB2)測(cè)定(放射免疫法):將放射性標(biāo)記的TXB2與血漿中的TXB2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗TXB2抗體,通過(guò)放射計(jì)數(shù)定量檢測(cè)TXB2水平,其升高提示血小板花生四烯酸代謝異常。

6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)測(cè)定(ELISA法):使用抗6-Keto-PGF1α抗體包被微孔板,加入血漿樣本和酶標(biāo)記抗體,通過(guò)顯色反應(yīng)定量檢測(cè)6-Keto-PGF1α水平,其降低提示血管內(nèi)皮功能障礙。

血小板活化標(biāo)志物CD62P檢測(cè)(流式細(xì)胞術(shù)):用熒光標(biāo)記的抗CD62P抗體染色全血或富血小板血漿中的血小板,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD62P陽(yáng)性血小板的比例,反映血小板活化程度。

血小板活化標(biāo)志物CD63檢測(cè)(流式細(xì)胞術(shù)):使用熒光標(biāo)記的抗CD63抗體染色血小板,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD63陽(yáng)性血小板的比例,CD63是溶酶體膜標(biāo)志物,其表達(dá)升高提示血小板脫顆?;罨?/p>

血小板ATP含量測(cè)定(生物發(fā)光法):利用熒光素-熒光素酶體系,檢測(cè)血小板內(nèi)ATP與熒光素反應(yīng)產(chǎn)生的光信號(hào)強(qiáng)度,定量ATP含量,反映血小板能量代謝狀態(tài)。

血小板鈣流檢測(cè)(熒光探針?lè)ǎ河肍ura-2/AM熒光探針負(fù)載血小板,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)或熒光分光光度計(jì)檢測(cè)血小板活化(如ADP誘導(dǎo))時(shí)胞內(nèi)鈣濃度([Ca2?]i)的變化,反映血小板活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。

血小板膜磷脂酰絲氨酸(PS)暴露檢測(cè)(Annexin V染色法):Annexin V是PS的特異性結(jié)合蛋白,用熒光標(biāo)記的Annexin V染色血小板,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)熒光陽(yáng)性血小板比例,反映血小板凋亡或活化狀態(tài)。

血小板凝血酶敏感蛋白(TSP)測(cè)定(ELISA法):采用雙抗體夾心ELISA法,包被抗TSP抗體,加入血漿樣本和酶標(biāo)記抗體,通過(guò)顯色反應(yīng)定量檢測(cè)TSP水平,其異常與血小板聚集功能相關(guān)。

血小板纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)測(cè)定(發(fā)色底物法):將血漿樣本加入含有纖溶酶原激活物(t-PA)和纖溶酶原的反應(yīng)體系,通過(guò)檢測(cè)纖溶酶降解發(fā)色底物產(chǎn)生的吸光度變化,定量PAI-1活性,其升高與血栓形成相關(guān)。

檢測(cè)儀器

血液細(xì)胞分析儀,血小板功能分析儀(PFA-100/200),流式細(xì)胞儀(如BD FACSCanto),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)儀,放射免疫分析儀,高效液相色譜儀(HPLC),生物發(fā)光檢測(cè)儀(如Berthold Centro LB 960),凝血分析儀(如Siemens CA1500),熒光顯微鏡(如Olympus BX53),離心機(jī)(如Eppendorf 5810R),電子天平(如Mettler Toledo XS205),移液器(如Eppendorf Research Plus),恒溫培養(yǎng)箱(如Thermo Scientific CO2培養(yǎng)箱),超低溫冰箱(如Thermo Scientific -80℃冰箱),自動(dòng)生化分析儀(如Roche Cobas 8000)。

實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器 實(shí)驗(yàn)室儀器

測(cè)試流程

循環(huán)載荷斷口疲勞臺(tái)階實(shí)驗(yàn)流程

注意事項(xiàng)

1.具體的試驗(yàn)周期以工程師告知的為準(zhǔn)。

2.文章中的圖片或者標(biāo)準(zhǔn)以及具體的試驗(yàn)方案僅供參考,因?yàn)槊總€(gè)樣品和項(xiàng)目都有所不同,所以最終以工程師告知的為準(zhǔn)。

3.關(guān)于(樣品量)的需求,最好是先咨詢我們的工程師確定,避免不必要的樣品損失。

4.加急試驗(yàn)周期一般是五個(gè)工作日左右,部分樣品有所差異

5.如果對(duì)于(循環(huán)載荷斷口疲勞臺(tái)階實(shí)驗(yàn))還有什么疑問(wèn),可以咨詢我們的工程師為您一一解答。

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